Цель. Изучение структуры селезенки крысы при подострой интоксикации организма одновременно химическими соединениями хрома и бора. Материал и методы. Исследования проводились на 20 белых крысах – самцах (10 контрольные, 10 экспериментальные). В течение 5 дней осуществляли подострое отравление комбинированным введением внутрижелудочно в дозе 10 мг/кг бихромата калия и 900 мг/кг тетрабората натрия. Гистологические срезы окрашивались гематоксилин – эозином и азур II-эозином. Определялись площади функциональных зон лимфоидных узелков белой пульпы, а также индекс красной / белой пульпы. Результаты. Установлено выраженное уменьшение площади герминативного центра лимфоидного узелка белой пульпы до 0,71±0,06% (в контроле 0,83±0,08%). Происходило уменьшение площади периартериальной зоны до 1,61±0,09% (в контроле 1,85±0,17%). Снижались площади мантийной зоны до 4,81±0,39% (в контроле 5,57±0,51%) и маргинальной зоны до 0,97±0,08% (в контроле 1,28±0,07%). В целом, в результате комбинированной интоксикации организма химическими соединениями хрома и бора происходило уменьшение общей площади лимфоидных узелков до 8,1±0,79% (в контроле 9,53±0,97%). Отмечалось уменьшение относительного веса селезенки по сравнению с массой тела животного, что приводило к уменьшению весового коэффициента селезенки до 2,85±0,29 (в контроле 4,09±0,41). Достоверно возрастал индекс красная / белая пульпа до 3,2±0,31 (в контроле 2,72±0,21). Заключение. Одновременное воздействие больших доз бихромата калия и тетрабората натрия угнетает функции лимфоидных (иммунных) органов организма, что подтверждается понижением веса и весового коэффициента селезенки, повышением индекса красная / белая пульпа и уменьшением площади функциональных зон лимфоидного узелка белой пульпы.
Актюбинская область Республики Казахстан является биогеохимическим регионом по хрому и бору, поэтому одной из главных задач работников здравоохранения является изучение влияния химических соединений этих элементов на организм человека и животных.
Хром входит в группу тяжелых металлов, особенность которых в окружающей среде определяется их устойчивостью, биодоступностью и вероятностью вызывать негативные эффекты в весьма низких дозах [1, 2]. Бор металлоид является естественным элементом земной коры, широко распространен в природе в виде борной кислоты, боратов и боросиликатов. Люди, в основном, подвержены действию бора через употребление вегетарианской пищи, питьевой воды, минеральных добавок и различных потребительских товаров. Бор является важным элементом роста растений. Для человека малое потребление бора является полезным для строения костей и нормального функционирования мозга; более высокие концентрации бора могут быть токсичными [3]. Химические соединения хрома и бора ухудшают экологическую обстановку. Как правило, возрастание неблагоприятных антропогенных факторов приводят к существенному росту иммунозависимых патологических состояний и аллергий [4]. Если иммунную защиту организма человека и животных осуществляет в основном лимфоидная ткань, то селезенка является наибольшим коллектором лимфоидной ткани, и как самый крупный периферический орган иммуногенеза, ответственна за эффективность клеточного и гуморального иммунного ответа, как врожденного, так и приобретенного иммунитета [5]. Содержание лимфоцитов в белой пульпе селезенки достигает 85% общего числа клеток, что составляет почти 25% всех лимфоцитов организма, причем практически на 50% лимфоциты белой пульпы селезенки представлены В –клетками. Таким образом, именно селезенка наряду с лимфатическими узлами является органом, обеспечивающим гуморальный иммунитет [6].
Учитывая единичность исследований комбинированных воздействий химических веществ на организм человека и животных, нами поставлена задача изучения воздействия на селезенку при подостром отравлении одновременно химическими соединениями хрома и бора.
Изучить структуру селезенки крысы при подостром отравлении одновременно химическими соединениями хрома и бора.
Исследование проводилось на 20 беспородных белых крысах – самцах (10 контрольные, 10 экспериментальные) массой тела 120–150 г, содержащихся в условиях вивария на стандартном пищевом рационе, свободном доступе к пище и воде, при соблюдении 12 часового светового режима. Экспериментальным животным в течение 5 дней осуществляли подострое отравление одновременным (комбинированным) введением внутрижелудочно в дозе 10 мг/кг бихромата калия (1/5 часть ЛД50) и 900 мг/кг тетрабората натрия(1/5 часть ЛД50) в физиологическом растворе в объеме 1,2–1,5 мл. Контрольным животным также вводили внутрижелудочно физиологический раствор в объеме 1,2–1,5 мл. Животных выводили из эксперимента после рауш наркоза декапитацией. Все манипуляции с животными проводились на основании разрешения этического комитета Западно–Казахстанского государственного медицинского университета имени Марата Оспанова (протокол № 1 от 25 декабря 2009 года). После гистологической проводки парафиновые срезы, толщиной 7–8 мкм окрашивали гематоксилин – эозином и азур II- эозином. С помощью светового микроскопа (Leica, DM 1000, Китай) с цифровой камерой в 20 полях зрения (об.10, 20,40,100 ок.10) определяли площади различных функциональных зон лимфоидных узелков белой пульпы (периартериальная зона, центр размножения, мантийная зона и маргинальная зона) методом наложения морфометрической сетки с 256 точкой, а также индекс красной / белой пульпы. Статистическая обработка полученных данных исследования проводилась по программе Statistica 10. Анализ результатов проводился с использованием средней арифметической, ошибки средней, критерия Стьюдента. Значимыми считали различия между средними показателями при P≤0,05.
Селезенка крыс контрольной группы имела типичное строение. Снаружи она была покрыта капсулой из плотной соединительной ткани. От капсулы внутрь селезенки отходили трабекулы, представленные волокнистой соединительной и гладкой мышечной тканями. Паренхима селезенки была образована лимфоидной тканью в виде лимфоидных узелков и периартериальными лимфоидными муфтами, составляющими белую пульпу. Между ними находилась красная пульпа. Соотношение белой пульпы и красной пульпы было 1:2,7. Первичные лимфоидные узелки представляли собой крупные плотные скопления лимфоцитов.
У контрольных животных относительная площадь белой пульпы составляла 25,25±2,42%, а относительная площадь красной пульпы равнялась 68,72±6,19% (табл. 1). Красная пульпа включала 3 вида сосудистых структур: артериолы (артериальные капилляры), синусоиды и пульпарные вены. Площадь, занимаемая трабекулами, составляла 6,03±0,57%. В белой пульпе относительная площадь лимфоидных узелков составляла 42,94±4, тогда как относительная площадь лимфоидного периартериального влагалища была несколько больше и равнялась 57,06±5,17%. Величина лимфоидных узелков селезенки в контрольных группах колебалась от 630 до 420 мкм (в среднем 480 мкм), они имели округло – овальную форму, с эксцентрично расположенными артериями. В лимфоидных узелках различали 4 нечетко разграниченные зоны: периартериальная зона, центр размножения (герминативный центр), мантийная и краевая (маргинальная) зоны. В контроле почти половина лимфоидных узелков имели отчетливо выраженных герминативных центров (рис. 1).
При комбинированной подострой интоксикации организма бихроматом калия и тетраборатом натрия происходило достоверное уменьшение относительной площади белой пульпы до 22,32±2,16% (в контроле 25,25±2,42%), возрастала относительная площадь красной пульпы, составляя 71,44±6,88% (в контроле 68,7±6,19) (табл. 1, рис. 2).
Площадь стромального аппарата селезенки оставалась на уровне контрольных данных (6,24±0,54%). Если, в белой пульпе относительная площадь лимфоидного периартериального влагалища (муфты) имела тенденцию к увеличению, составляя 59,71±6,14% (в контроле 57,06±5,17%), то относительная площадь лимфоидных узелков несколько уменьшалась до 40,29±3,95% (контроле 42,94±4,23%). Наблюдались изменения относительной площади функциональных зон лимфоидных узелков белой пульпы. Происходило выраженное уменьшение относительной площади герминативного центра до 0,71±0,06% (в контроле 0,83±0,08%) (табл. 2). Площадь периартериальной зоны уменьшилась до 1,61±0,09% (в контроле 1,85±0,17%). До 4,81±0,39% снизилась площадь мантийной зоны (в контроле 5,57±0,51%). Наблюдалось уменьшение площади маргинальной (краевой) зоны до 0,97±0,08 (в контроле 1,28±0,07). В целом, в эксперименте происходило достоверное уменьшение площади лимфоидных узелков до 8,1±0,79% (рис. 3) (в контроле 9,53±0,97%).
Следует отметить, что несмотря на достаточно большие дозы комбинированной интоксикации организма бихроматом калия и тетраборатом натрия, на гистологических срезах отчетливых деструктивных изменений не установлено.
В результате подострой комбинированной интоксикации организма химическими соединениями хрома и бора происходило уменьшение относительного веса селезенки по сравнению с массой тела животного, что приводило к уменьшению весового коэффициента селезенки до 2,85±0,29 (в контроле 4,09±0,41). Достоверно возрастал индекс красная / белая пульпа до 3,2±0,31 (в контроле 2,72±0,21).
В наших исследованиях высокая концентрация бихромата калия и тетрабората натрия приводила к уменьшению веса и индекса селезенки, что соответствует утверждению Hu, Q.Q. с соавторами [7] о зависимости эффекта действия химических соединений от их концентрации (дозы). По Чесноковой Л.А. с соавт. [2], особенно воздействие соединений хрома вызывает выраженные изменения в лимфоидных органах в виде снижения массы тимуса, селезенки. Снижение массы селезенки убедительно доказано в наших исследованиях. Учитывая системный характер реакции лимфоидных (иммунных) органов на комбинированное воздействие бихромата калия и тетрабората натрия, Григоренко Д.Е. с соавт. [8] предполагают вероятность развития функциональной недостаточности всех органов иммуногенеза и возможность снижения иммунного статуса у животных.
1. Комбинированное воздействие больших доз бихромата калия и тетрабората натрия понижает относительный вес и весовой коэффициент селезенки.
2. Увеличивает индекс красной / белой пульпы.
3. Уменьшает площади функциональных (периартериальная, герминативный центр, мантийная и маргинальная) зон лимфоидных узелков белой пульпы.
Конфликт интересов. Научное исследование проводилось в рамках научно-технической программы «Разработка новых технологий охраны здоровья детец и репродуктивного здоровья» № 0114РК00485 от 10.09.2014 г.
Таблица 1. Соотношение структур селезенки крыс в % (M±m)
Исследуемые группы |
Красная пульпа |
Белая пульпа |
Капсула и трабекулы |
Лимфоидные узелки белой пульпы |
Лимфатические периартериальные влагалища белой пульпы |
Контрольные |
68,7±6,19 |
25,25±2,42 |
6,03±0,57 |
42,94±4,25 |
57,06±5,17 |
Эксперимен тальные |
71,44±6,88 |
22,32±2,16* |
6,24±5,94* |
40,29±3,95* |
59,71±6,14 |
Примечание: * – Р<0,05 относительно контроля |
Таблица 2. Соотношение функциональных зон лимфоидных узелков белой пульпы в % (M±m)
Исследуемые группы |
Общая площадь |
Герминатив ный центр |
Периартериальная зона |
Мантийная зона |
Маргинальная зона |
Контрольные |
9,53±0,97 |
0,83±0,08 |
1,85±0,17 |
5,57±0,51 |
1,28±0,09 |
Экспериментальные |
8,1±0,79* |
0,71±0,06* |
1,61±0,09* |
4,81±0,39* |
0,97±0,08* |
Примечание: * – Р<0,05 относительно контроля |