Введение. Нейрофиламенты являются компонентом цитоскелета нейрона играющие важнейшую роль в обеспечении внутриклкточного транспорта веществ. Ишемия мозга приводят к различным повреждениям нейронов, затрагивающие, в том числе, и их цитоскелет. В условиях нефатальных повреждений нейрона морфологическим эквивалентом нарушения их функции выступают те или иные повреждения нейрофиламентов.

Цель исследования - выявить изменения экспрессии белков нейрофиламентов в сенсомоторной коре головного мозга при транзиторном нарушении кровоснабжения у крыс.

Материалы и методы. Исследования проведены на 115 крысах самцах линии Вистар весом 260-290 г. Животные были разделены на 4 группы: 1 - контроль (К), животные не испытывали никаких действий (n = 10); 2 (ЛО) – ложнооперованные, выполнялся доступ к левой общей сонной артерии, после чего рана ушивалась (n = 35); 3 (ПСА) – животным перевязывалась левая общая сонная артерия (n = 35). 4 (МЭА) - микроэмболизация кровеносных сосудов левого полушария головного мозга изолированными адипоцитами, (n = 35). Оперативные вмешательства выполнялись под тиопенталовим наркозом (50 мг / кг). Головной мозг забирался через 1, 3, 10, 30 и 90 суток после начала опыта после введения животным тиопентала натрия (200 мг / кг), фронтально разрезался на три части и средняя погружалась в 10% забуференный формалин (рН 7,4) на 24 часа. Материал уплотнялся в парафин, изготавливались гистологические срезы толщиной 4 мкм и окрашивались азур II-эозином. Иммуногистохимическая реакция проводилась в соответствии с протоколом производителя в стандартизированных условиях с первичным антителом против белка нейрофиламентов (NFP) (Monoclonal Mouse Anti-Human Neurofilament Protein Clone 2F11 (Dako, Denmark) и системой детекции EnVisionTM FLEX, (Dako, Denmark). Срезы докрашивались гематоксилином Gill. Выполнялись положительный и отрицательный контроль.

Результаты. Проведенные исследования показали, что у интактных животных NFP, выявляемые вышеуказанным антителом, не обнаруживались в перикарионах нейроцитов коры больших полушарий головного мозга крыс. В тоже время они интенсивно экспрессировались а нервных волокнах.

В группе ЛО животных не выявлялись изменения экспрессии NFP в коре левого полушария как в сравнении с контролем, так и с контрлатеральным полушарием.

При ПСА со стороны повреждения вместе с незначительными проявлениями изменений нейронов отмечалось некоторое общее снижение экспрессии NFP на 3 и 10 сутки после начала опыта. В эти же сроки иногда обнаруживались нервные волокна с неровными контурами, а также их единичные небольшие варикозные вздутия. Иногда в выявлялись участки размером 50-100 мкм в которых отмечалось более выраженное снижение выявляемости NFP.

МЭА, приводящая к дегенеративным и деструктивным в коре левого полушария, сопровождалась выраженными изменениями экспрессии NFP. Через 1 сутки после начала опыта на фоне некоторого общего снижения содержания NFP обнаруживались очаги различного размера с выраженным уменьшением его экспрессии, вплоть до полного исчезновения. Через 3 суток отмечалось некоторое уменьшение количества окрашенных нервных волокон. Среди них обнаруживались имеющие: неравномерное окрашивание на протяжении; неровные контуры и иногда варикозные вздутия. На 10 сутки опыта сохранялся мозаицизм в степени экспресии NFP в коре пораженного полушария. Однако при этом выявлялись множественные участки с гиперэкспрессией NFP. Кроме того обнаруживались множественные округлые образования размером 1-5 мкм с интенсивной экспрессией NFP. Иногда можно было видеть, что они располагаются на конце нервных волокон. Кроме того выявлялись единичные нейроны в пирамидном слое, в перикарионе которых выявлялась сеть нейрофиламентов. Через 30 и 90 суток также обнаруживался мозаицизм в экспрессии NFP в коре поврежденного полушария, проявляющий тенденцию к уменьшению. При этом выявлялись как очаги как гипо- так и гиперэкспрессиии NFP. Количество округлых структур с высокой экспрессией NFP прогрессивно убывало, и на 90 сутки они обнаруживались лишь изредка.

Выводы. Использование Monoclonal Mouse Anti-Human Neurofilament Protein Clone 2F11 (Dako, Denmark) позволяет выявить в коре больших полушарий мозга крыс NFP в составе нервных волокон, но не в перикарионах нейронов. Здесь они могли обнаруживаться лишь в единичных нейронах в восстановительный период после ишемической атаки. Острый период после индукции ишемии характеризуется снижением экспрессии NFP, носящий мозаичный характер. Восстановительный период после эпизода нарушения мозгового кровообращения характеризуется появлением округлых телец с высокой экспрессией NFP, которые могут быть расценены как колбы роста. Это позволяет говорить о том, что при ишемии мозга происходит массовое повреждение нервных волокон, которые в последующем регенерируют. Восстановительный период после ишемической атаки также характеризуется очаговой гипо- и умеренной гиперэкспрессией NFP, которые длительно сохраняются.