Исследования были выполнены на 32 белых нелинейных крысах. Эксперимент проводился в соответствии с рекомендациями этического комитета Саратовского государственного медицинского университета им. В.И. Разумовского
В процессе эксперимента было сформировано 3 группы животных:
1-я группа – контрольная, которая включала в себя 10 интактных крыс;
2-я группа–сравнительная – из 10 крыс с системными нарушениями микроциркуляции, вызванными аллоксановым сахарным диабетом;
3-я группа – опытная – из 10 крыс, которым на 21-е сутки после введения аллоксана выполняли АТПКЛ.
Системные нарушения микроциркуляции моделировали путем развития у животных сахарного диабета, вызванного аллоксаном, который оказывает прямое β-цитотоксическое действие на островковый аппарат поджелудочной железы и вызывает абсолютную недостаточность инсулина, характерную для сахарного диабета 1-го типа [2]. Аллоксан в дозе 100 мг/кг веса животного вводили подкожно однократно. Развитие сахарного диабета верифицировано статистически достоверным (р < 0,05) повышением уровня гликированного гемоглобина в 1,7 раза по сравнению с интакными животными до 9,3 (6,9; 12,1) %.
АТПКЛ у животных опытной группы осуществляли на 21-е сутки от начала эксперимента (введения аллоксана). Полнослойный кожный лоскут размером 0,1% от площади поверхности тела животного иссекался в межлопаточной области, обрабатывали поочередно в перекиси водорода 3%, этиловом спирте 70% и физиологическом растворе 0,9%. В ране, образовавшейся при иссечении лоскута, формировали подкожный карман, в который помещали обработанный аутотрансплантат. Операционная рана ушивалась наглухо [1].
Микрокровоток кожи тыльной поверхности стопы исследовали с помощью «ЛАКК-ОП» на 42-е сутки эксперимента у животных сравнительной и опытной групп. В качестве контроля были использованы ЛДФ-граммы интактных животных. Состояние микроциркуляции оценивали по величине показателя перфузии в перфузионных единицах. Забор крови у животных осуществляли на 42-е сутки эксперимента пункцией правых отделов сердца с использованием пробирок с активатором свертывания и разделительным полиэфирным гелем для получения сыворотки, а также с 3,2% цитратом натрия для получения плазмы и изготовления мазков. Уровень катехоламинов (КА) в крови в качестве основных вазоконстрикторных веществ определяли микроскопией с помощью микровизора мазков, окрашенных цитохимическим методом по А.И. Мардарь и Д.П. Кладиенко (1986) нитратом серебра и эозином с предварительной экспозицией в растворе бихромата калия для получения адренохромов сорбированных на эритроцитах. Уровень КА в крови выражали в условных единицах, определяемых как количество адсорбированных на 100 эритроцитах мазка гранул импрегнированных серебром адренохромов
Животные выводились из эксперимента передозировкой препаратов для наркоза непосредственно после забора крови. Ткани зоны АТПКЛ забирались и фиксировались в 10% формалине для гистологического исследования. В качестве контроля использовали образцы кожи интактных животных. Гистологические срезы толщиной 5 мкм окрашивались гематоксилином Майера) и эозином . Микроскопию препаратов зоны АТПКЛ выполняли с помощью системы AxioImager Z2. Количественный подсчет клеточных популяций дермы аутотрансплантата выполнялся при увеличении объектива ×40.
Статистическую обработку выполняли средствами пакета программ Statistica 10.0. Большинство полученных данных не соответствовали закону нормального распределения, поэтому представлены в виде медианы и интерквартильного размаха. Сравнение между группами проводилось с расчетом U критерия Манна–Уитни и показателя достоверности различия р, критический уровень которого принимали равным 0,05.