Русский
EnglishВысокоточный метод выявления пародонтопатогенов при тяжелой форме пародонтита
ID: 2022-08-5-A-19876
Оригинальная статья
ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России кафедра стоматологии терапевтической
Резюме
Молекулярно генетическая диагностика на основе анализа ПЦР позволяет выявить типы патогенных микроорганизмов, а также дает возможность проанализировать ассоциации микроорганизмов пародонтальных карманов, давая более точную оценку тяжести течения пародонтальной инфекции. Технология позволяет обнаружить не только маркеры пародонтита, но и генетически обусловленную предрасположенность к возникновению заболевания. Опираясь на полученные результаты, врач может четко прогнозировать тяжесть течения процесса, и персонализированый подход к дальнейшим диагностическим мероприятиям, а также к алгоритмическому планированию лечения.
Ключевые слова
рефрактерный пародонтит, пародонтопатогены, полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Введение
В прогрессировании заболеваний пародонта большое значение отводится специфической микрофлоре поддесневой биопленки. Для идентификации и количественной оценки микробиоты необходимо пользоваться точными методами микробиологической диагностики. К числу которых относится полимеразная цепная реакция (ПЦР), преимуществом которой является: высокая специфичность, быстрота получения результата (несколько часов), необязательное присутствие живых микроорганизмов, т.е. специальных условий для транспортировки не требуется. Для этого выявляются не сами живые бактерии, а их нуклетновые кислоты [2].
В последние годы благодаря достижениям микробиологии и иммунологии удалось получить убедительные данные, что в этиопатогенезе пародонтита важнейшая роль принадлежит резидентной транзиторной микрофлоре [7,5,3]. Использование метода полимеразной цепной реакции позволяет проследить за изменчивостью ассоциативных взаимоотношений среди представителей автономной флоры, в частности при частичном или полном вытеснении характеристических видов, усиленном размножении бактерий, несвойственных для полости рта [6,8].
Многочисленные исследования, опубликованные в отечественной и зарубежной литературе, свидетельствуют о том, что при хронических рецидивирующих инфекционных заболеваниях полости рта, возбудителями которых являются бактерии, грибы и вирусы, формируется вторичная иммунная недостаточность.
Современный уровень знаний о патогенности бактерий позволил определить специфические пародонтопатогенные микроорганизмы, к числу которых относятся Actinobacillusactinomycetemcomitans, Porphynomonasgingivalis, Prevotellaintermedia, простейшие. Основным фактором патогенности актиномицетов является их способность вырабатывать лейкотоксин, который вызывает лизис лейкоцитов, вследствие чего снижаются защитные функции тканей. Другим важным пародонтопатогеном является Porphynomonasgingivalis – грамотридцательный анаэроб, посредством выделения эндотоксина обладает высокой протеолитической активностью, индуцирует лизис костной ткани и одновременно ингибирует ее восстановление. Prevotellaintermedia является наиболее выявляемым микроорганизмом при остром и прогрессирующем течении пародонтита, продуцирует гидролитические ферменты, расщепляющие белки тканей пародонта, которые могут служить питательным субстратом для других микроорганизмов [4,9,10,11].
Цель
определение клинической значимости ПЦР-диагностики в выявлении видового состава бактериальных штаммов, выделяемых из зубных отложений у пациентов с рефлекторным пародонтитом.
Материал и методы
Поскольку ПЦР диагностика исключает различные осложнения и потенциально ошибочные этапы, установленный пороговый показатель теста обеспечивает то, что любой положительный результат имеет клиническое значение, а те концентрации бактерий, которые могут присутствовать в здоровой слизистой, дают отрицательный результат. Для осуществления молекулярно-биологического метода на одном или нескольких местах взятия проб бумажные штифты вводят с помощью пинцета в пародонтальные карманы, и оставляют на 20 сек. Затем бумажные штифты отправляют в микробиологическую лабораторию в транспортировочной пробирке Eppendorf. Далее проводят экстракцию бактериальных нуклеиновых кислот из взятых на исследование проб. Перед определением нуклеиновых кислот с помощью специфических генных зондов осуществляют их накопление посредством техники амплификации нуклеиновых кислот.
С генными зондами, нуклеиновый ряд которых точно совпадает с подлежащим выявлению целевым рядом, могут связываться только те фрагменты нуклеиновых кислот, которые обладают комплементарным рядом, из которого и происходят бактерии, подлежащие выявлению. Техника предусматривает увеличение количества копий специфического участка дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) до достаточного (определенного) числа, чтобы провести адекватное тестирование. Из количества связанных нуклеотидов получают также и полуколичественных результат, что обеспечивает высокую точность метода[3].
Проанализировано 100 амбулаторных карт стоматологических больных (53 женщины и 47 мужчин). Первую группу составили 40 больных хроническим генерализованным пародонтитом. Вторую группу - 40 пациентов с рефрактерным пародонтитом. Контрольную группу составили 20 обратившихся с целью медицинского осмотра.
Результаты
Стоит отметить, ПЦР позволяет идентифицировать намного большее количество микроорганизмов, метод более чувствительный, суммарное время исследования меньше, чем если использовать метод культивирования.
Анализ полученных данных позволил проанализировать, что у пациентов с рефрактерным пародонтитом по сравнению с хроническим пародонтитом существенно чаще встречались в содержимом пародонтальных карманов
A. actinomycetemcomitans – в 1,5 раза, P. gingivalis, T. denticola и P. intermedia - в 1,3 раза, Fusobacterium – в 1,4 раза; так же важно отметить, что в 1,5 раза чаще определялись ДНК H. pylori и в 1,6 - гриба рода Candida.
Обследование больных рефрактерным пародонтитом позволило определить в пародонтальных карманах в 100% случаев многокомпонентные ассоциации инфекционных агентов, относящихся к различным видам микроорганизмов, что совпадает с данными представленными другими авторами [5,6.3]. При этом, только у 10% пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом в содержимом пародонтальных карманов не выявлено ни одного из пяти основных пародонтопатогенных микроорганизмов. Один вид выявлялся в 3 раза чаще у пациентов с хроническим пародонтитом. Два вида микроорганизма выявлялись примерно в 1,75 раза чаще у пациентов с ХГП, три пародонтопатогена в 1,5 раза чаще у пациентов с рефрактерным пародонтитом (РП) – в 30% случаев, при 20% у пациентов с ХГП. Ассоциации из четырех микроорганизмов выявлялись у 15% пациентов ХГП и в 2 раза чаще у пациентов с РП - 30%. Пять видов пародонтопатогенов выявляли с небольшой частотой у больных ХГП (5%), при этом в 3 раза чаще у больных с РП – в 15% случаев.
Обсуждение
Анализ ассоциаций микроорганизмов пародонтальных карманов у пациентов с хроническим пародонтитом позволил выявить тенденцию к уменьшению числа ассоциантов по мере утяжеления патологического процесса в пародонте. Так, при пародонтите легкой степени, у подавляющего числа больных (85,5%) выявлялись от 2 до 4 микроорганизмов, при средне-тяжелой степени у 82,3% определялись от 3 до 5 видов микроорганизмов. При этом у пациентов с рефрактерным пародонтитом в 60% случаев выявлялись 3-4 вида пародонтопатогенных микробов.
Заключение
Использование полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволило определить то, что ассоциация пигментообразующих бактероидов (P.gingivalis, P.intermedia) определялась у 58% больных хроническим пародонтитом и 78% пациентов с рефрактерным пародонтитом. У 30% пациентов ХП и 45% с РП были выявлены ассоциации пигментообразующих и грамотрицательных видов микроорганизмов (actinomycetemcomitans, Fusobacterium).
Таким образом, преимущества полимеразной ценой реакции позволяют давать более точную оценку степени тяжести пародонтита, так и составлять индивидуальные рекомендации местной и системной антибактериальной терапии.
Литература
- Булкина Н.В., Моргунова В.М. Современные аспекты этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний пародонта, особенности клинических проявлений рефрактерного пародонтита / Фундаментальные исследования. – 2012. - №2. Часть 2. – С. 416 – 420.
- Дмитриева Л.А. Пародонтит / МЕДпресс-информ - 2007. – С.504.
- Дмитриева Л.А., Максимовский Ю.В. Терапевтическая стоматология: национальное руководство / ГЭОТАР – Медиа - 2009. – С.919
- Зырянова Н.В., Григорян А.С., Грудянов А.И. Видовой состав анаэробной микрофлоры пародонтального кармана в зависимости от стадии пародонтита/ Стоматология. №4, 2009. С.43-47
- Моргунова В.М. Клинико-иммунологические и молекулярно-генетические критерии диагностики и эффективности лечения больных рефрактерным пародонтитом. диссертация к. м. н.: 14.01.14 / ГОУВПО "Саратовский государственный медицинский университет". Саратов, 2013
- Моргунова, В.М. Микробиологическая характеристика содержимого пародонтальных карманов больных пародонтитом / Саратовский научно – медицинский журнал. 2011. Том 7. -№1. С. 312-314.
- Николаева, Е.Н. Царев В.Н., Лагутин М. Разработка алгоритма диагностики хронического генерализованного пародонтита на основе микробиологических и иммунологических показателей/ 2007. Том 6. №3. С. 34-40.
- Царев В.Н., Николаева Е.Н., Максимовский Ю.М., Плахтий Л.И. Применение полимеразной цепной реакции для диагностики и контроля эффективности лечения генерализованного пародонтита/ Росссийский стоматологический журнал. 2002. №2. С. 12—19.
- Amano A., Kuboniva M., Nakagawa I. et al. Prevalence of specific genotypes of Porphyromonas gingivalis FimA and periodontal health status. J Dent Res 2000; 79: 1664—1668.
- Colombo A.V., Silva C.M., Haffajee A., Colombo A.P. Identification of oral bacteria associated with crevicular epithelial cells from chronic periodontal lesions. J Med Microbiol 2006; 55: 609—615
- Importance of Virulence Factors for the Persistence of Oral Bacteria in the Inflamed Gingival Crevice and in the Pathogenesis of Periodontal Disease Gunnar Dahlen1,Amina Basic 2, Johan Bylund Clin Med2019 Aug 29;8(9):1339.doi: 10.3390/jcm8091339
