Болезнь Альцгеймера (БА) является одной из наиболее социально значимых проблем здравоохранения. Актуальность настоящего исследования определяется значительной распространенностью болезни Альцгеймера (БА). В большинстве экономически развитых стран на ее долю среди других причин деменции приходится от 50 до 70% [2]. Возможность изучения молекулярно-генетических основ патогенеза – важный шаг на пути персонализированной терапии данного заболевания. Технология с использованием ДНК-биочипов позволяет выявить определенные генетические маркеры у пациентов с ДАТ. Немаловажным отличительным моментом использования этой методики является ее экономичность и высокая информативность.

Цель работы. Разработка и выявление оптимального набора молекулярно-генетических маркеров ДАТ и исследование их полиморфизм.

Материалы и методы. Проведено исследование образцов ДНК 50 пациентов ДАТ (39 женщины и 11 мужчин) в возрасте от 52 до 78 лет, проходящих лечение в 20, 21 психиатрических отделениях 2 ГКБ и СОПБ Святой Софии. Диагностика БА проводилась на основании критериев МКБ-10 (1994), в соответствии с которыми определялись сенильный (рубрика F00.1) и пресенильный (рубрика F00.0) типы БА. Для решения поставленных задач было проведено клинико-психопатологическое, нейропсихологическое, сомато-неврологическое обследование пациентов, находившихся на стационарном лечении во 2 ГКБ и СОПБ Святой Софии. Для стандартизации критериев включения в исследование были использованы следующие психометрические шкалы: мини-тест для оценки психического состояния - MSE (Folstein M.F. et al., 1975); шкала клинической оценки деменции - CDR (Morris J.C., 1993); шкала глобального ухудшения психических функций - GDS (Reisberg B. et al., 1982); Все обследуемые были обследованы методами компьютерной и/или магнитно-резонансной томографии. Психические, поведенческие и аффективные расстройства оценивались с помощью психоневрологического опросника NPI. У 16% обследованных была диагностирована ДАТ с ранним началом, 84%  страдали ДАТ с поздним началом. При ДАТ с ранним началом наблюдалось сочетанное или изолированное нарушение высших корковых функций у 88% пациентов на этапе легкой деменции, у 100% при умеренной и у 100% тяжелой деменции, а при ДАТ с поздним началом соответственно у 27% больных, 73% пациентов и 2-х больных. У больных ДАТ с поздним началом преобладали интеллектуально-мнестические расстройства над нарушениями высших корковых функций, а также сохранность моторного компонента праксиса. Кроме того, в зависимости от тяжести клинических проявлений деменции по шкалам MMSE, CDR все обследованные были разделены на три группы: 1 группа – больные с легкими проявлениями деменции (13 человек), 2 группа – пациенты с умеренными проявлениями деменции (21 человек), 3 группа – больные с тяжелыми проявлениям деменции (16 человек).

            В настоящее время разработаны и внедрены в клиническую медицину фармакогенетические анализы, позволяющие считывать и обрабатывать большие объемы биологической информации. В работе использовалась методика, разработанная в Институте молекулярной биологии им. В.А.Энгельгарда РАН, которая основана на гибридизации в микроячейках биологического чипа. Технология анализа генетического полиморфизма предполагает предварительную мультиплексную амплификацию фрагментов ДНК с использованием флуоресцентно меченых праймеров и добавление меченого продукта на биочип, где происходит его гибридизация с иммобилизированными в геле зондами. Ячейки с иммобилизованными зондами на планшете располагаются рядами, каждая ячейка содержит уникальный зонд [1].

В исследовании использовался биочип, позволяющий изучать полиморфизм генов: кодирующих аминокислотную последовательность белка аполипопротеина Е (АроЕ) [3], альфа-2-макроглобулина (A2M) [6], активаторов процессов апоптоза (BIN1, CR1, ApoJ) [1, 4, 5, 7].

            Результаты. Изучены полиморфизмы генов АроЕ, A2M, BIN1, CR1, ApoJ на биочипе. Интенсивность свечения гидрогелевых ячеек биочипа отражается в виде информационного окна, в котором величина «столбцов» прямо пропорциональна интенсивности свечения.

Мультифакториальная природа ДАТ нередко обусловлена генетическим полиморфизмом генов, продукты которых обеспечивают различные звенья сопряженных патогенетических путей, в частности, таких как: нейродегенерация, сопровождающаяся воспалением, процессы апоптоза, образование белка-амилоида,

Представлен анализ распределения частот гомозигот по мутантному аллелю некоторых исследуемых полиморфизмов генов у больных ДАТ (таб.1). Так, среди больных ДАТ по ряду генетических полиморфизмов достоверно чаще встречаются гомозиготы по мутантным аллелям, что может служить причиной признания этих мутаций генетическими маркерами ДАТ.

В нашем исследовании из 50 изученных образцов ДНК по полиморфизму CR1, ApoJ и BIN1 (гены, ответственные за апоптоз) гомозиготы встречались в 8, 16 и 13 образцах соответственно, причем большинство принадлежало больным с тяжелыми проявлениями деменции.

Представлено 6 примеров разнообразия полиморфизмов изучаемых генов (таб.2).

Заключение. Описанные в работе молекулярно-генетические маркеры метаболических процессов вовлечены в развитие когнитивных нарушений у больных ДАТ. Мутации этих генов при определенных условиях могут влиять на выраженность дементных проявлений. Проведенный анализ распределения частот некоторых исследуемых полиморфизмов генов у больных ДАТ свидетельствует о значимости указанных мутантных аллелей в определении патогенетических механизмов заболевания. Использованная методика исследования является высокоинформативной, удобной в работе. Дальнейший многофакторный молекулярно-генетический анализ ДАТ позволит определить роль каждого из патогенетических факторов ДАТ в формировании болезни и наметить выбор нейропротекторной терапии индивидуально для пациента.