Skip to Content

МЕТОД ДЕТЕКЦИИ КОНЕЧНЫХ ПРОДУКТОВ ГЛИКИРОВАНИЯ В ЖИВОТНЫХ МОДЕЛЯХ САХАРНОГО ДИАБЕТА

ID: 2021-01-213-T-19432
Тезис
ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, Кафедра фармакологии и биоинформатики

Актуальность. Гликирование – основа патогенеза поздних осложнений сахарного диабета (ПО СД) и путь продукции конечных продуктов гликирования (КПГ). Разработка методов детекции КПГ в моделях СД – актуальная задача экспериментальной фармакологии.

Цель исследования: Настройка метода спектрофлуориметрической детекции КПГ ex vivo.

Материалы и методы. Животные: крысы Sprague Dawley (ООО «НПК БиоТех»). Моделирование ПОСД инъекцией стрептозотоцина 60мк/кг. Забор и подготовка биоматериала: (i) биопсия кожно-хрящевого материала края депиллированной ушной раковины; (ii) биоматериал высушен при температуре 4-8°С в асептических условиях в течение 72 ч; (iii) биоматериал взвешен, залит раствором гидроксида калия (10М) в конечной концентрации 10%; (iv) образцы инкубированы 96 ч (4-8°С); (v) затем образцы центрифугированы (центрифуга Sigma, 5000 об./мин., 15 мин.), плотная фаза негидролизованных фрагментов удалена. Проведение анализа: (i) гидролизат разбавлен 1:10 фосфатным буферным раствором (0.05М, pH 6,4), и аликвотирован в лунки черного плоскодонного микропланшета (COSTAR, объем аликвот 200 мкЛ); (ii) проведен спектрофлуориметрический анализ, λпогл 370 нм, λисп 440 нм (спектрофлуориметр Infinite 220 Pro, TECAN). Калибровка: проведена с применением ИФА-стандарта с содержанием КПГ 26666 нг/мл (Cloud Clone). Статистический анализ: критерий Манна-Уитни (p≤0,05).

Результаты. При калибровке установлена линейность зависимости общей концентрации КПГ стандарта от интенсивности флуоресценции (R2=0,999). Интенсивности флуоресценции КПГ в образцах животных с экспериментальным СД и интактных статистически значимо отличаются, составляя 5684,9±166,1 у.е. и 3626,2±149,5 у.е. соответственно (р<0,0001). Это указывает на чувствительность тест-системы к экспериментальной патологии.

Вывод. Настроена методика определения флуоресцирующих КПГ на основе спектрофлуориметрического анализа щелочных гидролизатов инцизионных кожно-хрящевых биоптатов уха крыс с экспериментальным сахарным диабетом.

Ключевые слова

Гликирование, спектрофлуориметрия, КПГ
0
Ваша оценка: Нет



Яндекс.Метрика