Введение. Туберкулез (ТБ) по-прежнему входит в число инфекционных болезней, уносящих наибольшее число жизней. Согласно оценкам экспертов ВОЗ, число заболевших ТБ в 2013 г. составило 9,0 млн. человек, а 1,5 млн. человек умерли от этой болезни [5]. Туберкулез мочевой системы составляет 30-40% внелегочных форм  заболевания и занимает среди них 1-е место. Мужчины и женщины страдают одинаково часто, при этом наибольшее распространение туберкулезные поражения мочевой системы отмечены у лиц от 20 до 40 лет, в то время как заболеваемость среди детей остается низкой. Микобактерия туберкулеза  обладает высокой вирулентностью и патогенностью. В отличие от других бактерий, микобактерии туберкулеза абсолютно резистентны к стандартной антибактериальной терапии [2]. Последнее диктует необходимость изыскания новых немедикаментозных путей воздействия на микобактерии туберкулеза. Таким новым методом,  ингибирующим рост Micobacteriumtuberculosis в культуре, могла бы стать фотодинамическая терапия (ФДТ), в основе которой лежит предварительная обработка микробных клеток фотосенсибилизатором (ФС) с последующим облучением бактериальной культуры светом лазера [6]. Если длина волны лазерного излучения совпадает с максимумом поглощения ФС, образуется синглетный кислород, оказывающий губительное действие на микобактерии. Такова была исходная идея данной работы. Однако в ходе выполнения исследования был получен неожиданный результат: оказалось, что сам ФС обладает отчетливым бактериостатическим эффектом в отношении роста микобактерий туберкулеза. Последнее послужило основанием для публикации настоящего сообщения.

Материалы и методы. В качестве ФС был выбран препарат фотодитазин, выпускаемый фирмой "Вета-Гранд" (Россия), представляет собой диметилглюкаминовую соль хлорина Е6 и используется в настоящее время в качестве фотосенсибилизатора для флюоресцентной диагностики и фотодинамической терапии злокачественных опухолей [1,3,4].

Лекарственно устойчивые штаммы микобактерий туберкулеза были получены при посеве респираторного материала (мокрота), полученного от больных, проходящих лечение в ГБУЗ «Тамбовский областной клинический противотуберкулезный диспансер». Профили лекарственной устойчивости (ЛУ) были получены с использованием стандартной методики оценки лекарственной устойчивости микобактерий на плотной яичной питательной среде Левенштейна-Йенсена, не содержащей крахмал (HiMedia, Индия) методом абсолютных концентраций (приказ МЗ РФ от 21 марта 2003 г. N 109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации»), а ЛУ к рифампицину и изониазиду дополнительно оценивали с помощью постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) и последующей гибридизации генетического материала M. tuberculosis на биочипах «ТБ-БИОЧИП» (ООО «Биочип-ИМБ», Россия) по методике, рекомендованной производителем. Все штаммы M. tuberculosis были множественно лекарственно устойчивыми (МЛУ), т.е. резистентными к основным противотуберкулезным препаратам – изониазиду, рифампицину, стрептомицину, этамбутолу и чувствительными к пиразинамиду (табл. 1, 2). 

Фотодитазин разводили в дистиллированной воде до конечной концентрации  4*10^-5 моль/л. Бактериальную взвесь M. tuberculosis с титром 100 000 КОЕ/мл питательной среды Middlebrook 7H9 смешивали с раствором фотосенсибилизатора в соотношении 1:9 (итоговый объем образца равен 5 мл) в пластиковых чашках Петри диаметром 10 см и инкубировали в течение 15 мин при температуре 37^оС. В качестве контроля использовали взвесь M. tuberculosis каждого штамма, которую вместо раствора сенсибилизатора разводили дистиллированной водой, сохраняя объемное соотношение 1:9.

Посев производили на жидкую питательную среду Middlebrook 7H9 в индикаторные пробирки MGIT автоматизированной системы BACTEC^TM MGIT^TM 960 (Becton Dickinson, Sparks, MD). Основным компонентом системы ВАСТЕС^TM MGIT^TM 960 является пробирка MGIT (Mycobacteria Growth Indicator Tube) c флюоресцентным индикатором роста (Трис 4,7-дифенил-1,10-фенантролин рутениум хлорид пентагидрат), который заключен под силиконом на дне пробирки и погашен высокими концентрациями кислорода, растворенного в среде. Размножающаяся микробная популяция активно поглощает кислород, высвобождая флюоресцентный компонент, который начинает светиться при ультрафиолетовом облучении. Ускоренный рост микобактерий и снижение контаминации обеспечивается дополнением бульона 7Н9 жидкой питательной добавкой OADC и пятью лиофилизированными антибиотиками PANTA, которые вносят в индикаторную пробирку перед посевом. OADC содержит четыре питательных компонента: олеиновую кислоту, бычий сывороточный альбумин, декстрозу и каталазу. Смесь PANTA включает в себя препараты, подавляющие жизнедеятельность грам+, грамм– и анаэробных бактерий, а также грибов, она состоит из полимиксина В, амфотерицина В, налидиксовой кислоты, триметоприма и азлоциллина. Прибор ВАСТЕС 960 оценивает пробирку как позитивную, если количество живых микробов в ней достигло 100000 на 1 мл среды.

В каждую пробирку вносили по 0,5 мл каждого образца из чашек Петри. Выполняли по пять повторных посевов, учитывая возможность случайных колебаний роста культур микобактерий. Наблюдения проводили в течение месяца. Результат фиксировался автоматической системой при достижении стандартного титра микобактерий в пробирке и выражался в сутках после посева.

Статистическая обработка результатов экспериментов проводилась с использованием программы GraphPad Prism-5. Различия с контролем признавались достоверными при р<0,05. Результаты наблюдений представлены в табл. 3.

Как видно из таблицы, воздействие самого ФС фотодитазина в 1,32 раза замедляет скорость роста микобактерий туберкулеза в жидкой среде, т.е. оказывает отчетливый бактериостатический эффект. Данный эффект препарата может быть связан с его способностью оказывать влияние на метаболизм микробной клетки или изменять свойства её мембранных структур. Интимные механизмы данного эффекта фотодитазина требуют дальнейшего изучения.

Таким образом, нами впервые установлено ингибирующее влияние фотосенсибилизатора фотодитазина на рост полирезистентных штаммов микобактерий туберкулеза.